网状纤维染色的方法及应用
网状纤维染色的方法及应用
——李国平
包括：胶原纤维、网状纤维、弹性纤维
1、直径0.2-1um,分支多，交织成网，由III型胶原构成，常伴有其它类型的胶原、蛋白多糖和糖蛋白，PAS染色呈紫红色网状纤维具有64nm的周期性横纹，HE染色不着色，具有嗜银性，经银染法染成黑色，故又称嗜银纤维。
2、网状纤维存在于各种组织中，常见于上皮的基膜，还有平滑肌、脂肪细胞、毛细血管和神经纤维都有网状纤维包裹，多分布于造血器官和淋巴网状器官，如红骨髓、脾、淋巴结、
肝、扁桃体和胸腺，消化管和呼吸道管壁的淋巴组织内，并成为这些器官的网状支架。
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组织 |
vG |
Masson三色法 |
MSB |
PTAH |
PAS |
网状纤维 |
六胺银 |
自体荧光检测 |
HE |
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胶原蛋白 |
红色 |
蓝绿色 |
蓝色 |
橘红 |
+ |
灰 |
— |
— |
深粉 |
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网状蛋白 |
黄色 |
蓝绿色 |
蓝色 |
棕黄 |
++ |
黑 |
— |
— |
— |
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弹力蛋白 |
黄色 |
|
蓝色 |
棕黄 |
— |
— |
— |
+ |
粉 |
|
肌肉 |
黄色 |
红色 |
红色 |
蓝色 |
+ |
灰 |
灰 |
— |
深粉 |
|
基底膜 |
黄色 |
蓝绿色 |
蓝色 |
橘红 |
+++ |
灰 |
黑 |
— |
粉 |
|
骨 |
红色 |
蓝绿色 |
蓝色 |
橘红 |
+ |
灰 |
— |
— |
深粉 |
|
软骨 |
变化 |
变化 |
变化 |
变化 |
++ |
变化 |
变化 |
— |
紫 |
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纤维素 |
黄色 |
红色 |
红色 |
蓝色 |
+/— |
灰 |
— |
— |
粉 |
1、网状纤维的染色可分为染料染色和金属浸染。
2、网状纤维的染色方法主要使用银盐。
1、氨水直接反应型：James法，Lillie法，Lillie-Fullmer法。
2、氢氧化钠/钾反应型：Gomori法，Gordon-Sweet 法，Wilder法，Perdran法，Bielschowsky法。
3、碳酸锂/钠反应型：Foot法 ，Hortega法，Hamason-Lushbangh法，DelRio-Hortega法。
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类别 |
James |
Foot |
Gomori |
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硝酸银水溶液 |
5% 20ml |
10% 10ml |
10% 8ml |
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氨水滴定 |
+ |
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碳酸锂饱和水溶液 |
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10ml
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氢氧化钾水溶液 |
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10% 2ml
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沉淀洗涤 |
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+ |
+ |
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氨水滴定 |
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+ |
+ |
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后加硝酸银水溶液 |
|
|
+ |
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后加氨水 |
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|
+ |
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去离子水稀释至 |
40ml
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100ml
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100ml
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溶液性状 |
稍浊
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清亮 |
稍浊
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1、脱蜡至水化
2、0.5％高锰酸钾8-10分钟
3、2%草酸漂白即可，水洗
4、2％铁明矾媒染10分钟，细水速洗
5、Gomori氏银氨液1分钟，晃动，细水速洗
6、10％福尔马林还原1分钟，水洗
7、0.2％氯化金调色，水洗
8、2%或5％硫代硫酸钠30秒，水洗
9、核固红复染，水洗，脱水，透明，封固
包括：充分氧化、深度漂白、适度媒染、精准镀银、精细还原、精准分化
1、充分氧化
①作用：使网状纤维具有选择性，增强染色能力，改善背景色调，减弱对胞核的着染，并有利复染。
②氧化的试剂： 0.5%高锰酸钾
高锰酸钾 0.5g
蒸馏水加至 100ml
③影响氧化的因素：浓度、时间、试剂有效性
2、深度漂白
①漂白的作用：漂白后使组织无颜色，避免干扰
②漂白的原理：
2MnO4- + 5C2O42- +16H +==2Mn2+ + 10CO2 +8H2O
③试剂：2%草酸
3、适度媒染
①媒染的作用：是加强网状纤维对银氨液的选择性
②媒染的原理：水溶液内能够电离出三价铁离子，正电荷，可以和纤维表面的蛋白结合，在纤维和金属银作用过程中，起到媒介作用
③媒染试剂：2%的硫酸铁铵（俗称铁明矾）
④影响因素：温度，时间,冲洗的技巧
4、精准镀银
①镀银的作用：网状纤维是由含有糖蛋白的胶原蛋白组成，易与氨性银结合，即带正电荷的二氨合银离子被具有嗜银性物质的网状纤维吸附，银氨液中的银络合物在媒染剂的作用下与组织中蛋白结合
②镀银的原理：AgNO3+KOH→AgOH↓+KNO3
2AgOH → Ag2O↓+H2O
Ag2O+4NH4OH→2[Ag(NH3)2]OH+3H2O
③镀银的试剂：托伦试剂
④试剂的配制：染色的关键，关系成败
⑤Gomori银氨液的配制：
10％AgNO34份+10％KOH1份→灰黑色沉淀（记住总量）→加水洗涤反复3次(凑足总量)→滴加浓氨水→沉淀刚好溶解→加10％硝酸银→沉淀再次生成→滴入0.5-1滴的浓氨水，观察沉淀物将溶尽，尚留数个小颗粒时停止→加蒸馏水10倍稀释（托伦试剂）
5、精细还原
①还原的作用：把与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成棕色的金属银
②还原的原理：
2[Ag(NH3)2]OH+HCHO →2Ag↓+HCOOH+4NH3+H2O
③还原的试剂 ：4%甲醛 （10%福尔马林）
④影响因素：中性、酸性、操作技巧
6、精准分化和定影
①分化的作用及定影:组织经银氨液染色及甲醛还原后，使多余的银与氯化金反应产生氯化银，然后再用硫代硫酸钠洗去组织上未还原的银盐，从而使组织内各成分显示清晰，已与网状纤维结合的银盐固定得更加牢固。
②分化使用试剂: 0.2%氯化金
③定影使用试剂：2%硫代硫酸钠
1、复染的作用：使对比明显，减少非特异染色
2、复染的争论：要不要复染，选择什么方法复染
3、使用的试剂：核固红
4、试剂配制：0.1%核固红：取洁净烧瓶加蒸馏水100ml、硫酸铝5g加热完全溶解后，加核固红0.1g混合溶解，（加入少许麝香草酚)降室温，过滤，备用
组织、脏器网状支架的保留、塌陷或完全破坏，网状纤维的多少、粗细、疏密和有无断裂，对于判断病变的性质、程度及其发展与转归具有重要意义。
注：建议配合视频学习，效果更佳。
回放更新时间：8月8日，回放视频观看方式【关注“达科为医疗”公众号，点击达学堂菜单—课后回放进入学习】
病理·达学堂
2020.07.23
