达学堂·答疑讨论
Q:特殊染色的时候会加阳性对照吗?是怎么做的?
答:阳性对照是保证染色流程准确性及染色试剂有效性最好的方法。一般来说,阳性对照就两种方法:①相同的染色每批次加一张相应的阳性对照;②染色时,待染切片旁加阳性对照(此种方法虽然耗费组织及染液,但能确保每张切片的准确性)。
Q:六胺银染色片子上组织还没有呈现黄色染液就变黑了,这时候应该怎么办?要继续染色?还是要更换染液再继续染?
答:新配制使用的六胺银染液呈清亮液体,作用时要控制好作用的温度和时间(在58~60°C恒温箱内作用20~60分钟,至切片呈黄褐色,显微镜下观察真菌呈黑褐色为适),染液很快就变成黑色(出现黑色银镜反应),可能是因为六胺银染液混合配制时间过长、放入恒温箱预热时间过长或温度过高等原因而造成,此时不能再继续使用,应将切片取出,放置蒸馏水中浸泡,重新配制新的染液再进行染色。
Q:请问弹力纤维地衣红染色,不是棕红色,而是偏红,对比不明显,应该怎么纠正?
答:一般染弹力纤维不建议使用地衣红染色,主要用醛品红或维多利亚蓝染色法。地衣红虽然染液配制及染色流程都相对简单。但染色的时间较长,阳性及对比度要稍微不如其他方法。地衣红染弹性纤维呈棕红色至深棕色,如偏红,可能是染液使用过久、染色时间不足、分化不足及染液pH偏高等原因所造成,地衣红染液pH一般在0.8-1.6之间着色都较好,当>2,背景着色会加深,会造成背景分化不掉,对比度不清楚,可延长70%乙醇分化时间或用0.5~1%盐酸乙醇适当分化,调整好对比度阳性就明显了。
Q:抗酸染色脱蜡和透明用环保透明剂怎么去做?
答:目前市面上环保透明剂种类较多,各种主要成分不一定都一样,使用前,用阳性对照片先来检测一下,如果没影响可以使用。
Q:巴氏染色中,橙黄G亮绿染的分别是完全角化细胞和角化前细胞胞质,为什么在六胺银染色法中都可以使用呢?
答:橙黄G和亮绿两种染液在宫颈细胞巴氏染色中,主要作用的细胞质,在EA/OG染液中,橙黄G和亮绿两种染液是根据其分子量的大小着染不同的细胞质(同时进行)。在真菌六胺银染色中,橙黄G或亮绿的作用都是一个性质和目的,用来复染背景,提高对比度,所以,只需要使用一种染液复染(淡染)即可。
Q:结核杆菌苯酚碱性品红染色法时,脱蜡时是二甲苯和乙醇时间都会影响菌体染色吗?染色后快速脱水透明是因为什么?
答:脱蜡至水经过二甲苯和乙醇时间长了,菌体中与苯酚碱性品红结合的分枝菌酸(脂肪酸/脂类物质)容易被有机化合物溶解破坏了,染色就呈阴性了,所以染色前二甲苯和乙醇要快速。染色后快速乙醇脱水和二甲苯透明也是一个道理,乙醇脱水时间一长容易将苯酚碱性品红与分枝菌酸结合形成的红色复合物破坏。
Q:对于化疗后反应的评估标准,不同的实体瘤是否相同?
答:不同的肿瘤是不一样的,目前达成共识最多的是乳腺癌,乳腺癌也有七八种方式,但是总的原则基本一样,就是三分法或五分法。不同的肿瘤,评估是不一样的,是根据文献来评估的。对临床来说,完全是PCR或是接近PCR的,才是最有价值的。