达学堂·答疑讨论
Q：冻组织的时候加几滴水，加以固定，这个方法行吗？
答：这个没有试过，原则上讲是不行的。
Q：甲状腺冰冻有时候切片染完上面胶质有时候有，有时候没有，怎么回事呢？
答：95%酒精固定有时胶质会脱落。出现这种情况除部分与制片有关外，与组织本身的结构特点、胶质的吸收、浓聚状态也有关。切片也不要太薄。返蓝氨水浓度不要太高，0.2%足够了。洗片时动作轻柔。
Q：如果科研标本取材下来冷冻保存，后期拿出来再切冰冻，怎么处理才能减少冰晶的产生？
答：组织冷冻是动态的，温度低于-65度蛋白酶才失活，科研要冷冻组织就要速冻到-70度或液氮。切片时把组织取出来放在冰冻机里复温20分钟左右就差不多可以切了。
Q：返蓝液ph大于8.2会有什么影响呢？
答：返蓝液一般pH为7.5-9.0，8.2最佳（国外推荐）。我实验是pH 大于12会掉片。pH太高，如果冲洗不干净，会影响后续伊红染色。
Q：水溶性伊红染液和醇溶性染液什么更不容易褪色？用于标记取材时胃黏膜等小组织一般用什么做标记？
答：两者染色原理有异，水溶性有离子键作用，所以加冰醋酸增强染色作用明显，醇溶性以取代反应和静电为主。处理好的组织，用这两种伊红效果都可以。我们不标记，要标记就得把伊红放到酒精里，直接打到组织表面或加到固定液都容易褪色。
Q：能讲下冰冻免疫组化的固定吗，哪种固定液最好？
答：国外推荐，靳老师自己过去做免疫荧光都用4度丙酮10分钟，略挥干后PBS洗，后续做。要做免疫组化，丙酮并不好，组织收缩比较严重，可用甲醇、AF液，也可以用厂家专门的IHC固定液。
Q：为什么甲状腺冰冻用速冻了反而切出来一丝一丝的，可能是冻过了，但肉眼观感觉又没冻好，该怎么控制速冻时间了？
答：我们讲课或做实验时都是理想状态，在实际工作中，不可能给每一类组织设个专门的温度，甲状腺胶质含大量线状糖蛋白，容易玻璃化，大的胶质结节又没有间质支撑，冻得温度低于脆点就容易发脆。工作中如有多台冰冻机，可设置一台温度在-18度的专门切易脆的组织。冷冻组织时，随时观察，冻好就切，不要修的太深，脆的话稍复温，一般都能解决。
