Q：柠檬酸高压修复温度和时间是多少？是高压锅柠檬酸烧开一直修复15分钟吗？

答：在南京这样海拔的地方，柠檬酸高压修复的温度达到100多度是没有问题的，时间的话大概控制在15分钟左右。柠檬酸高压修复的时间总体对组织形态的影响较小，所以这个修复时间比碱性修复的时间要长。当然15分钟这个时间的前提是组织处理要保证是规范的，如果组织处理不好的话，这个修复时间可能会造成一定的涂片。如果是碱性修复的话，会对组织形态有一定的损坏，要特别注意的是，在自然冷却的过程中，碱性修复仍然会对组织有一定的影响，可能会造成过度修复的后果。关于高压锅柠檬酸烧开一直修复15分钟，我们是烧开以后放进去，然后维持15分钟，这个时间实际操作下来的话对于柠檬酸来说的话问题不是很大，而且修复的效果也很好，对组织的破坏很小。

Q：免组化包埋时强调温度对抗原的影响，抗原修复时高温高压为什么不会造成抗原的破坏呢？

答：应该是没有影响的，但有些单位包埋时会用镊子在酒精灯上烧一下，要注意这时候镊子的温度蛮高的，抗原修复的时候可以达到100度的高温，无论是对形态也好，抗原也好，都没有影响。

Q：做甲状腺组织冰冻，镜下总是会有类似气泡的东西，已经影响医生看片了。

答：这种现象比较常见，过去我们在很多群里讨论过这个问题，没有绝对的消除方法，这种现象存在于胶纸丰富饱满的的滤泡多一点，中央的空洞在显微镜下有立体感，微调时似多层中空的小洞，空洞壁比较厚，呈紫黑蓝色，也不像苏木素着色，应该是这种结构的光反射，这种现象，我当时分析是冷冻时滤泡中央的高浓度/聚集的甲状腺球蛋白（中性糖蛋白）会冷冻到脆点以下并局部有高渗非冻水环境，所以经酒精等湿固定后收缩造成胶纸收缩梯度，中央最明显，高渗非冻水丢失。后来我染了几张不同固定液的比较，发现这种现象在甲醇和丙酮固定中最明显（但此种固定染色比较艳丽），用95%酒精+5%冰醋酸固定后减少，片子略晾干后固定效果比较明显，但染色就不鲜艳，有的胶质会脱失。我的建议是1、甲状腺组织不要冷冻时间过长，如果胶质脆，复温适度；2、可用AF或95%酒精+5%冰醋酸固定，略晾一下再固定；3、入苏木素前在水里多泡几十秒；4、湿封切片（不能晾干后再入二甲苯）。你在实践中再摸索。

Q：现在肿瘤的浸润深度临床要求高，取材就比较宽，现在大组织大切片有必要限制在1.5#1.5#0.2

答：其实“大组织大切片”在根治性标本中很常见，原国家卫生部的技术操作常规中规定的标本取样大小基本上都被打破。从临床病理工作实际情况来看，标本过大的影响远没有过厚的影响大，2毫米的厚度考虑到的是固定和脱水等试剂的渗透能力与时效。平常包埋时，面积过大的标本很难包埋平整，（包埋盒也放置不下）也难以切片完整。因此，最好不要过大过厚。

Q：切片机可以把刀座等零件拆下来水煮吗？然后擦干净再组装。

答：不建议用水煮的方法清除刀座等配件上的蜡屑和组织碎片。因刀座上有不少位置是需要加注润滑剂的，水煮后容易造成金属元件表面腐蚀甚至变形。因金属的热胀冷缩特性，水煮极易影响刀座的稳定性，严格的讲，加热的方法尽量少用，我们最推荐的方法还是每一次使用后的及时清洁！用软毛刷清洁！

Q：冰冻组织过小，像切缘比较薄小的时候，应该怎么加冷冻剂才能比较好切到位？

答：一般是先加注包埋剂做一个基座，然后在这个基座上再加包埋剂冻标本，并且一定要及时用冷锤把标本压平整。切片时注意正确调整样本角度，否则无法切完整。

Q：主流的几种免疫组化仪都有抗体混匀么？

答：主流的全自动免疫组化仪都有试剂混匀技术的，这是该类设备必不可少的功能。