达学堂·答疑讨论
Q：冰晶形成原理？在哪查？
答：这个原理涉及很多相关学科知识，无机化学、有机化学、 细胞培养、生物大分子不同相态的热力学定律、吉布斯自由能等等。我也是在很多的书籍及网站上学习，然后由把它们尽量和实际工作结合起来考虑， 试图来解决冰晶和冷冻的相关问题。我也是只知道一点皮毛，大家可以多学习，包括热力学定律、临界尺寸，细胞生物学组织应急反应等等。
Q：有时间切冰冻时候，冰捶卸不下来，是怎么回事？用极冷台了。
答：一要经常清理冷锤冷冻面，保持清洁平整。二是等组织冷冻1/2后再盖冷锤，盖上去后等组织冻好后再取冷锤。
Q：一般组织速冻几分钟后形成玻璃态？
答： 按现在冰冻机的降温速率和最低温度（速冷台可达-40度），2mm-3mm厚的组织一般2分钟左右就可以，要实时观察。
Q：甲状腺组织做冰冻快速，切的时候表面组织还没冻硬，组织切下来的薄片肉眼看还是有很多洞洞，像冻过了的样子，这是为啥呢？
答：组组没有冻好，就是说组组没有进入玻璃态，此时如果切片，组组的受到外力时形变很大，各种成分不能统一受力， 出现各种异常现象都很正常。 组织冷冻好后再切，如果过了脆点，发脆，可以适度复温。
Q：冰冻切片中的肺组织怎么处理才能避免切片中的空洞？
答：肺脏终末组织-肺泡本身是薄壁空腔，在肺气肿病变及结核、肿瘤等病变周围经常存在代偿性肺气肿，如有肺大泡时这种情况就更明显。做冰冻时经常遇到这种情况，冷冻后组织切面有不少空腔，不好展片，也容易出现丝丝拉拉感觉要掉片子了。一般这种情况如出现肿瘤等病变的周围，不需要过多关注，冷锤不要压得太早，组织容易变形，尽量用压板（调整压板的长度），一般切片染色问题不大。如果空洞很大（肺大泡）、也多，此时就要在组织周边多加点胶，也可以往组织表面挤点胶，部分会渗入空洞中，切片后如苏木素前片子在水里多泡10-20秒，把胶充分溶掉，要用专用OCT包埋剂，片子比平时厚1-2um。
Q：有的抗体推荐用EDTA，可以改为柠檬酸吗？
答：大部分抗体两种修复液都可以，具体需要实际工作中摸索条件。
Q：容易掉片的组织怎么处理？
答：首先还是要确保规范的组织处理，前序流程没做好，不要老指望后序能有方法来弥补。
