达学堂·答疑讨论
Q:反蓝液求推荐。
答:我们一般用0.2%的氨水,也可以用饱和碳酸锂的液体。
Q:冷冻组织时,样本托是否一定要先预冷冻好?有的老师把样本托放冷冻切片机在,取材放好组织后,才放到速冻台上冷冻,切片也没有明显冰晶问题。卡头是否一定要制冷,卡头制冷在使用中有多大实际作用?
答: 理论上讲冷冻托预先冷冻更好,但实际工作中这种操作性不佳,如果手套上有水,一碰冷的样本托就粘住了,组织放上去后如果想再把组织切面调整一下也比较困难,OCT包埋剂先挤上去的和把组织放好后挤上去的冷冻时偶尔也会裂开,切片时碰到硬的组织有时也容易磕掉下来。我没有采用预冷冻,冰的导热速度是水的4倍,我用蘸水的滤纸放在样本托上取好组织后再取冷冻,速度也快得很,没有啥影响。样本夹头的制冷一般不用开,机箱温度就可以。
Q:伊红用水溶性的好还是醇溶伊红好?
答:理论上讲水溶性伊红染出来立体感更强,三种颜色对比更好,还不容易脱色,在放置过程中颜色可能会加深。但是现在我觉得水溶性伊红的质量不太好, 溶解效果差,特别一加酸,经常产生沉淀。所以 最早我们把醇溶性伊红用高浓度的盐酸让它沉淀,把钠离子去掉置换出醇溶性伊红。我个人个人比较喜欢用醇溶性伊红。
Q:冰冻切片机切感染标本后怎样消毒?
答:首先尽量不要接收这些标本,让临床填预约单时注明传染病感染信息。如果已经接受并切片了, 新鲜标本是存在感染风险的, 开紫外线灯40分钟表面消毒,或用专用甲醇过氧化氢(樱花有专配)喷涂、75%酒精擦拭;甲醛蒸汽不好操作,可作为彻底消毒时使用。
Q:靳老师那里用的冰冻固定液是什么?
答: 95%酒精90ml再加10ml的甲醛溶液(浓甲醛溶液,市售的含40%甲醛)。
Q:速冻台一般用起意义大不大,还是只用机动就可以了呢?
答:每个冰冻机都配有冷冻台,冷冻台的温度比机箱温度低,半导体冷冻速率也快,如果启动快速制冷(一键启动),冷冻台在1分钟内可降到大约-60度左右。但经常启动的话,半导体部件容易坏,一般我们把组织放到冷冻台后冷冻就可以。如遇到脂肪多的可以一键启动快速冷冻。
Q:冰晶问题是不是可以先固定再冷冻就可以解决了?而且细胞收缩更复合石蜡切片的细胞形态,不容易误差。其实原来病理科冰冻切片都是先固定再冷冻切片的,80年代后期开始有恒温冷冻切片机后才改过来的。
答:冷冻的组织不要固定, 直接冷冻;先固定要不就冻不住(酒精固定后,酒精的玻璃态温度很低)、要不就是大冰晶(甲醛固定)。过去甲醛固定过的组织一般要经蔗糖、明胶置换出水分后再冷冻才能改善效果。