达学堂·答疑讨论
Q：我在高压锅柠檬酸修复时用到了6分钟，时间长了吗？
答：要看具体检测切片。6分钟的计时是怎么计？一般情况下，如果高压锅喷气后才计时，6分钟修复后，组织切片浮片明显，细胞核很难着染苏木素，即核染色质被破坏。
Q：如果手工免疫组化今天修复完来不及做了，那可以冷却后放到蒸馏水或PBS中第二天再做么？
答：不建议，会增加脱片的机率。
Q：ALk(D5F3)阴性对照出现非特异性显色，是什么原因？
答：多数是组织处理出现问题，或肺泡腔大量渗出物也可出现非特异染色，一般情况下ALk(D5F3)阴性对照与ALk(D5F3)同时出现非特异染色。
Q：阳性对照可以选我们曾经做过的阳性组织么？
答：可以。
Q：如果一批片子有二十种试剂，应该怎么选择对照？
答：可参虑多组织蜡块的对照组织（即将多种组织包在同一蜡块上），这些组织应涵盖你单位所使用的抗体能表达的组织，但对于某些治疗用药的抗体（如Her2 应包含3+、2+、1+及0四种染色强度的对照组织）。
Q：我们是基层单位，目前还是手工免疫组化，请教手工免疫组化的容易出错的地方以及应对方法？
答：手工免疫组化容易出现的问题：（1）抗原修复质量容易出现波动，尤其是没有建立规范的作业指导书的单位，以及岗位轮换比较频繁的单位，每位老师都按照自己的想法和习惯行事。因此科室必须建立每个操作环节的作业指导书，并进行全员培训、考核；每位操作者均应按要求进行操作；（2）加样环节容易出现问题，如滴加的试剂不足，导致干片现象；加样前组织上残留的PBS过多稀释了抗体，导致染色信号减弱；切片未放平，抗体倾斜到一边，导致阴阳染色；加样吸头划伤组织；抗体孵育时间掌控不好；（3）苏木素复染过深或过浅；（4）操作不熟练情况下容易遗漏某操作步骤，导致染色失败；（5）没有外对照，染色结果存在疑问。
Q：对于一些要用低PH修复的抗体怎么调方案？是否要换其他厂家的抗体。
答：不太理解这位老师提问的意思，每种新使用的抗体均应进行验证（包括适合的修复液、修复方式及时间、抗体稀释度等）。当然试剂说明书会有推荐的修复液及修复方案，可参考。不一定要更换厂家。
