达学堂·答疑讨论
Q:抗原修复时,什么时候该选择酸性的修复液,什么时候该选择碱性的修复液呢? 有什么标准吗?
答:没有标准,每种新使用的抗体均应进行验证。当然试剂说明书会有推荐的修复液,可参考。
Q:如何消除背景色,减少背景染色呢?
答:产生背景非特异染色的原因很多,有组织处理质量差、一抗浓度过浓、抗体孵育时间长或抗体质量差等不同原因所致非特异染色,应针对不同原因进行处理。
Q:如果是外院会诊很久之前的蜡块要怎么选着操作方案呢?
答:若年限超过5年,抗原修复时间及抗体孵育时间均要延长,一抗的稀释度可能也要适当降低(即一抗要浓一些),手工及仪器检测条件不同。比如某一抗体常规检测是Ventana MCC1 ,一抗30min/37℃ 年限较长的库存蜡块,可能要用到 SCC1,一抗60min/37℃。这是举例,具体的要测试和验证。
Q:高压锅修复时,修复液直接加在高压锅里,还是装在染色缸里用水浴加热加压?
答:两种都可以,但修复时间不一样。若将修复液直接倒在高压锅内,高压锅喷气阀喷气后计时3-5min;隔水高压,时间可延长,具体多少分钟合适?不同抗体、不同检测试剂盒会稍有区别,要测试。
Q:请问如何解决温度低,导致免疫组化表达率低的问题。
答:·手工检测:若样本量不大,建议用25℃或37℃水浴箱恒温孵育抗体;
·仪器检测:通过空调调整温度。
Q:如果用苦味酸固定,还需要抗原修复吗?如果需要,那么相比甲醛修复时间要更长还是更短?
答:这位老师所指的是单纯的固味酸作为固定液?还是含有苦味酸的固定液?若固定液中含甲 醛,就应该行抗原修复。
Q:手工修复抗原注意事项呢?
答:微波修复:(1)确保抗原修复时维持温度为99-100℃,维持时间20-25min(计时是从修复液沸腾后开始计时),为确保修复温度,不建议用大容器盛装修复液进行抗原修复;(2)确保组织在修复过程中必须浸泡在修复液中,必在时修复中途应添加修复液;(3)正式用于临床诊断前,先进行修复条件验证;
高压修复:(1)严格控制抗原修复时间,防止过度修复;(2)计时是从高压锅的压力阀开始喷气才进始计时,一般3-5分钟;(3)高压修复加温时间结束后,应立即降压,打开锅盖后室温冷却。